CRISPR-Cas9 in vitro

Modulo 1: Introducción y fundamentos del sistema CRISPR-Cas

• Introducción e historia del sistema CRISPR-Cas
• Orígenes del sistema CRISPR-Cas
• Elementos del CRISPR locus
• Clasificación de los sistemas CRISPR
• Funcionamiento del sistema CRISPR-Cas9

Modulo 2: Componentes y características del sistema CRISPR-Cas9

• Estructura y conformación de proteína Cas9
• Definición y elementos de RNA’s guía
• Conceptualización de sitios PAM
• Determinación de DNA objetivo
• Exposición de ortólogos de Cas9

Modulo 3: Mecanismo molecular del sistema CRISPR-Cas9

• Formación del complejo Cas9-RNA (RNP)
• Reconocimiento de sitios PAM
• Mecanismo de unión a DNA objetivo
• Proceso de corte de DNA
• Determinación de ON y OFF targets
• Sistemas CRISPR-Cas alternativos (Cas12 y Cas13)

Modulo 4: Aplicaciones y perspectivas del sistema CRISPR-Cas9

• Aplicaciones principales y alternativas de los sistemas CRISPR-Cas
• Mecanismos y técnicas empleadas para edición y regulación genética
• Screening y uso en diagnóstico de sistemas CRISPR
• Empleo de variantes de Cas9 para edición y regulación génica
• Sistemas anti-CRISPR
• Aplicaciones controversiales y regulación ética

3 sesiones teóricas (12 hrs): Lunes – Miércoles (10:00am-14:00pm)

Modulo 5: Fundamentos experimentales para empleo de CRISPR-Cas9

• Introducción a la edición genética empleando el sistema CRISPR-Cas9
• Determinación y obtención de secuencias de DNA objetivo
• Características principales para diseño de sgRNA
• Características principales para diseño de plantilla de edición (HDRt)
• Métodos de entrega del sistema CRISPR-Cas9
• Métodos para validación de edición genética

Modulo 6: Taller de diseño para obtención de componentes del sistema CRISPR-Cas9

• Manejo de bases de datos para obtención de secuencias de DNA objetivo
• Diseño experimental y evaluación de RNAs guía mediante servidores web
• Diseño experimental para generación de HDRt
• Resolución de casos de estudio y ejemplos prácticos

2 sesiones teórico-prácticas (8 hrs): Jueves – Viernes (10:00am-14:00pm)

Modulo 7: Generación e implementación del sistema CRISPR-Cas9 diseñado para el corte de distintos genes de interés biomédico y biotecnológico

• Síntesis de plantilla de DNA por PCR (overlapping)
• Preparación de componentes para síntesis de sgRNA mediante IVT
• Demostración (técnica) del proceso de purificación de proteína SpCas9 mediante cromatografía de afinidad
• Acondicionamiento de componentes del sistema CRISPR (sDNA, sgRNA y SpCas9)
• Desarrollo de ensayo endonucleasa mediante CRISPR-Cas9 in vitro
• Análisis de resultados obtenidos del ensayo CRISPR-Cas9 in vitro

2 sesiones prácticas en laboratorio (20 hrs):

Sesión 1: Sábado (09:00-14:00 y 15:00-20:00)
Sesión 2: Domingo (08:00-14:00 y 15:00-21:00)

Imparte: Doctorante. Sergio Aaron Tinajero Vargas
Responsable: Dr. Edgar Morales Ríos

Departamento de Bioquimica, CINVESTAV-Zacatenco

ALUMNOS Y PRE Y POSGRADO: $7000.00 MN
INDUSTRIA: $10,000.00 MN

Las inscripciones estarán abiertas hasta agotar los lugares disponibles (20 lugares), estando completamente sujetos a cubrir el costo total del curso ($7, 000.00). El pago podrá realizarse en dos pagos de manera diferida, siendo el primero de ellos de $3,000.00 para considerar apartado su lugar. El pago total del curso deberá realizarse a más tardar dos semanas antes de su inicio (Miércoles 13 de Noviembre) para su validación.

Nombre de la cuenta: R11L4J601410052024
Número de cuenta: 7500023874
CLABE: 072180075000238742
Banco: Banco Mercantil del Norte, S.A.