Examen de Maestría
Clarissa Vargas Ornelas
Les invitamos al examen final de la IBT. Clarissa Vargas Ornelas para obtener el grado de Maestría en Biotecnología de Plantas
🗓️ jueves 26 de septiembre
⏰ 11:00 Seminario público
⏰ 14:00 Lectura del acta
📍 Auditorio Manuel Ortega, Unidad Irapuato
Biotecnología de Plantas | Cinvestav Irapuato
Examen para obtener el grado de Maestría que presenta:
IBT. CLARISSA VARGAS ORNELAS
" Localización in situ de enzimas involucradas en el metabolismo de fructanos en Agave tequilana Weber var. azul "
Jueves 26 de septiembre de 2024
11:00 horas SEMINARIO PUBLICO
14:00 horas LECTURA DEL ACTA Y AGRADECIMIENTOS
Auditorio de la unidad Irapuato
Manuel Ortega Ortega
DIRECTORAS DE TESIS
Dra. June Kilpatrick Simpson Williamson
Dra. María Jazmín Abraham Juárez
COMITÉ TUTORIAL
Silvia Edith Valdés Rodríguez
Carlos Humberto Ortiz Ramírez
RESUMEN
Los fructanos son polímeros de fructosa que se encuentran en el 15% de las especies de angiospermas y que funcionan no solo como carbohidratos de reserva sino también como reguladores osmóticos, están fuertemente asociados con la suculencia y participan en la señalización de respuestas a diferentes tipos de estrés y en etapas del desarrollo vegetativo y reproductivo. En Agave, los fructanos se sintetizan a partir de moléculas de sacarosa inicialmente por la acción de la enzima 1-SST y se alargan en los residuos de fructosa o glucosa por la acción catalítica de varios tipos de fructosiltransferasas (FT), como 1-FFT, 6G-FFT y 6-SFT que agregan unidades de fructosa. Las fructano exohidrolasas (FEH) son las enzimas encargadas de degradar fructanos y liberar residuos de fructosa. Aunque existe evidencia de la presencia de las enzimas involucradas en el metabolismo de fructanos en las vacuolas y apoplasto, se desconoce la localización precisa de las enzimas asociadas en los tejidos del Agave tequilana. Para proporcionar información de la ubicación de las enzimas de síntesis SST-1, 6GFFT-1, 2 y de degradación FEH-1 & 4 de Agave tequilana, en este trabajo se utilizó el sistema heterólogo de N. benthamiana para expresar transitoriamente las enzimas AtqSST-1 Atq6GFFT-1, Atq6GFFT-2, AtqFEH-1 AtqFEH-4 y colocalizarlas con una colección de diferentes marcadores de organelos, como aparato de Golgi, peroxisoma, membrana plasmática, tonoplasto y lumen vacuolar. Para determinar la localización de estas enzimas en el sistema nativo A. tequilana, se produjeron anticuerpos contra las enzimas SST-1, 6GFFT-2, FEH-1 y FEH-4 utilizando proteínas recombinantes para las inmunizaciones de animales. Nuestros resultados mostraron que las enzimas transferasas AtqSST-1, Atq6GFFT-1 se localizan en la membrana plasmática (PM), peroxisomas (PX) y esta última también se pudo ver en cloroplastos. La localización de la isoforma Atq6GFFT-2 se encontró en membrana plasmática, membrana vacuolar (MV), aparato de Golgi (G), peroxisomas, cloroplastos y no se identificó en el lumen vacuolar (LV), mostrando el mismo patrón de localización que Atq6GFFT 1. La isoforma AtqFEH-1 no mostró una localización subcelular clara, solamente de manera parcial en estructuras de membrana plasmática (MP) y vacuolar (MV) y en cloroplastos. Mientras que la isoforma AtqFEH-4 tuvo una clara localización subcelular en estructuras de membrana plasmática (MP) y vacuolar (MV), aparato de Golgi (G), peroxisomas (PX), ligeramente con el lumen vacuolar (LV) y en cloroplastos. En tejido de A. tequilana se observó que FEH-1 se encuentra fuertemente en los haces vasculares, en células del floema, de los diferentes tejidos analizados, pero principalmente en los de botón floral y de sección verde de hoja, así como anteras y en los cloroplastos del clorénquima respectivamente. Por su parte FEH-4 se encontró principalmente en posibles vacuolas de células del mesófilo y anteras en tejido de botón floral y en cloroplastos de zonas fotosintéticas activas en hoja verde, aunque también se observó en los haces vasculares con menor intensidad de FEH-1.